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人ELISA試劑盒溫育實驗反應動力學研究
瀏覽次數:1222發布日期:2015-04-07

    在人ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在人ELISA試劑盒中似不恰當。
    ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么人ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。
    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為徹底,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在人ELISA試劑盒中一般不予采用。
   若用保溫箱,人ELISA試劑盒板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將人ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,人ELISA試劑盒反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時的室溫應嚴格限制在規定的范圍內,標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,人ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

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